作者：深圳三利仪器  转载自：  发布日期：2013-10-31

z新外标法顶空进样器气相色谱法检测环氧乙烷（EO）灭菌残留量操作流程

编者：懂生，深圳市三利公司，该流程仅作参考，望根据实际情况中要以国家标准为依据！

1．原理

在一定温度下，用萃取剂——水萃取样品中所含环氧乙烷（EO），用顶空气相色谱法测定环氧乙烷含量。

2. 检测依据
GB/T 16886.7-2001生命科学生物学评价 第七部分
ISO 10993.7-2008 EO灭菌残留量
3. 使用仪器
 GC2020 气相色谱仪 （FID检测器）；氮氢空一体机  ；毛细色谱柱 ；顶空进样瓶 20mL (包括硅胶封口垫，聚四氟乙烯膜，封口钳)； 分析天平 / 精度0.1mg；容量瓶 50mL/100mL 。

4．职责

        操作人员严格按规定要求进行操作，确保操作过程中的精密度。

5．气相色谱仪条件（参考）

6 环氧乙烷标准贮备液的配制

取干燥的100 ml容量瓶，加入60 m1水，精密称定；在冰水浴中吸取液态环氧乙烷约1．2 ml放入该容量瓶中，摇匀，密塞，称定重量，前后两次称重之差，即为溶液中所含环氧乙烷重量；再加水至刻度。精密量取1mL至1 000 mL量瓶中, 加水稀释至刻度,即得(每1 mL含环氧乙烷12. 519 ug)。作为标准贮备液，低温保存备用。

7. 试样制备

7.1试验样制备应在取样后立即进行，否则应将供试样品封于由聚四氟乙烯密封的金属容器中保存。

7.２将样品截为５㎜长碎块，取1.ｇ放入萃取容器中，加5ｍＬ水（或取２.０ｇ放入萃取容器中，加１０ｍＬ水，）容器内压力为常压，在恒温水浴６０℃±１℃中放置２０ｍｉｎ后做试样备用。

8．试验步骤

8.１用贮备液配制１×１０^-３ｇ／Ｌ～１×１０^-２ｇ／Ｌ六个系列浓度的标准溶液。

在冰浴条件下，将上述对照品溶液定量稀释成每1 mL 含环氧乙烷对照品0. 417 3、0. 834 6、2. 087、4. 173、8. 346、12. 52 ug的系列标准溶液, 分别取5mL置于顶空瓶中, 按气相色谱法测定。

或在冰浴条件下，依次精密吸取标准储备溶液0．5、1、2、3、4和5 m1（注意标上序号！浓度依次为0. 417 3、0. 834 6、2. 087、4. 173、8. 346、12. 52 ug），分别置于20 m1的顶空瓶中，精密加水至5 m1，封盖，摇匀。按气相色谱法测定。实际操作是：依次把装有六个系列浓度的标准溶液放入顶空进样器对应的位置，开始测定。每个样品平衡温度5-10分钟后，按启动键（顶空上）启动机器联动，即顶空进样和色谱工作站同时启动。保存每次环氧乙烷标准溶液的图谱。注意其峰高或面积。

8.２用标准样所测数据，绘出标准曲线。参考工作站说明书（电子版）。

8.３依据该标准曲线，用外标法测定样品的环氧乙烷（EO）灭菌残留量。

9. 注意事项
9.1 气相色谱仪中FID检测器关火时应先关闭氢气通路，然后关闭空气通路。
9.2 气相色谱仪在关机前，应将进样口、柱温箱和FID检测器温度降至室温或低于50℃才可关机。
9.3 制备样品的分析人员进行的所有工作，包括化学试剂的使用，应在通风橱内进行，并穿戴防护衣。使用化学药品之前应阅读材料安全方面的说明。环氧乙烷（EO）还需要在冰浴中操作。
9.4 在一个分析中尽量同一人操作。保证实验的正确性。

9.5 气化垫在一定时间后需要更新，每次需要注意进样气化垫是否漏气。

参考：

平衡温度80℃

试液制备

 1 截为5mm长的碎块，取1.0g放入20ml萃取容器中，精密加水5ml，密封80℃ 平衡20

分钟

2环氧乙烷制备标准贮备液

  取干燥的50ml容量瓶，加水30ml，加瓶塞，精确称重，用注射器注入约0.6ml环氧乙烷，不加瓶塞，轻轻摇匀，盖好瓶塞，前后两次称重之差，即为溶液中环氧乙烷的重量。加水制成约10mg/ml的环氧乙烷溶液，作为标准贮备液

取1ml的贮备液稀释到100ml的容量瓶中，即得到1ug/ml

同样的方法制成1ug/ml~10ug/ml六个梯度溶液

精确量取5ml置20ml萃取容器中，密封，恒温60摄氏度40分钟

1 2 4 6 8 10六种标液

移液管100~1000ul，5ml各一支